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蔗糖合成酶(分解方向 SSⅠ)測(cè)試盒測(cè)定意義

蔗糖是源(葉片等)光合產(chǎn)物向“庫(kù)"器官運(yùn)輸?shù)闹饕螒B(tài)。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13)是雙向反應(yīng)酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代謝的關(guān)鍵酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性對(duì)于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意義。

測(cè)定原理

SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游離果糖和UDPG，采用3,5－二硝基水楊酸法測(cè)定還原糖的含量來(lái)反映酶活性的高低。

需自備的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、離心機(jī)、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰
樣品中AA提?。?/span>

1.按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行室溫勻漿，然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15 min；自來(lái)水冷卻后，8000g，，4℃離心10min，上清液置冰上待測(cè)。

2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

3.血清等液體：直接檢測(cè)。

計(jì)算公式如下：

1、血清（漿）LAP活力的計(jì)算:

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；2000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，2000萬(wàn)。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制，且避光保存，配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。

2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果測(cè)定的吸光值過(guò)高（高于2.5），用蒸餾水稀釋后再測(cè)定。

3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無(wú)吸收峰，因此，570nm處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

4．檢出限為100μmol/L。

幾丁質(zhì)酶3樣蛋白2ELISA試劑盒 CHI3L2免費(fèi)代測(cè)試劑

集落刺激因子2受體βELISA試劑盒 CSF2Rβ免費(fèi)代測(cè)試劑

集聚蛋白ELISA試劑盒 AGRN免費(fèi)代測(cè)試劑

集鈣蛋白2ELISA試劑盒 CASQ2免費(fèi)代測(cè)試劑

集鈣蛋白ELISA試劑盒 CASQ免費(fèi)代測(cè)試劑

原ELISA試劑盒 PK免費(fèi)代測(cè)試劑

結(jié)合蛋白ELISA試劑盒 KAL免費(fèi)代測(cè)試劑

8ELISA試劑盒 KLK8免費(fèi)代測(cè)試劑

2ELISA試劑盒 KLK2免費(fèi)代測(cè)試劑

15ELISA試劑盒 KLK15免費(fèi)代測(cè)試劑

14ELISA試劑盒 KLK14免費(fèi)代測(cè)試劑

13ELISA試劑盒 KLK13免費(fèi)代測(cè)試劑

12ELISA試劑盒 KLK12免費(fèi)代測(cè)試劑

11ELISA試劑盒 KLK11免費(fèi)代測(cè)試劑

激活素受體樣激酶1ELISA試劑盒 ALK1免費(fèi)代測(cè)試劑
蔗糖合成酶(分解方向 SSⅠ)測(cè)試盒解氨酶(TAL)測(cè)試盒/分光光度法50管/48樣

解氨酶(TAL)測(cè)試盒/微量法100管/48樣

類(lèi)胡蘿卜素(carotenoid)含量測(cè)試盒/分光光度法50管/48樣

類(lèi)胡蘿卜素(carotenoid)含量測(cè)試盒/微量法100管/96樣

類(lèi)黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶(UFGT)測(cè)試盒/分光光度法50管/48樣

類(lèi)黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶(UFGT)測(cè)試盒/微量法100管/96樣

離子結(jié)合型果膠(ISP)含量測(cè)試盒/分光光度法50管/24樣

離子結(jié)合型果膠(ISP)含量測(cè)試盒/微量法100管/48樣

氨基肽酶(LAP)測(cè)試盒/分光光度法50管/48樣